Toxicity of phospholipases A(2) D49 (6-1 and 6-2) and K49 (Bj-VII) from Bothrops jararacussu venom

Abstract

Purified phospholipase A(2) (PLA2) enzymes from Bothrops jararacussu snake venom were examined to evaluate NIH 3T3 and COS7 fibroblast cytotoxicity, as well as muscle myotoxic and inflammatory activities. Separation of fractions Bj-VII (from BthTX-I; a Lys49 PLA2 homolog) and 6-1 and 6-2 (from BthTX-II; an Asp49 PLA2) from B. jararacussu snake venom by SDS-PAGE in tricine buffer in the absence and presence of dithiothreitol revealed a homodimer with an estimated molecular mass of similar to 30 kDa (monomer mass similar to 15 kDa). This finding indicates that these toxins form dimeric complexes-a previously reported tendency among PLA2s. These toxins were assayed for viability with the MTT assay, which is used to examine the effects of phospholipases on the mitochondrial viability of cells. The toxins were also assayed for cytolysis of the fibroblast cell lines NIH 3T3 and COS7 by quantification of lactate dehydrogenase released into the medium. The results indicate that the PLA2s 6-1, 6-2 and the Bj-VII PLA2 homolog studied here induce moderate footpad edema and local myotoxicity. Moreover, exposure to these phospholipases led to a reduction in fibroblast viability; at the 1 mu M dose of PLA2 tested, a reduction of 50% in cell viability was observed. The present findings indicate that the inflammatory activity observed in envenomation may be correlated with the cytotoxicity observed in fibroblasts.

As enzimas fosfolipase A2 purificadas (PLA2) do veneno de serpente Bothrops jararacussu foram examinadas para avaliar a citotoxicidade dos fibroblastos NIH 3T3 e COS7, bem como as atividades miotóxicas e inflamatórias musculares. Separação das frações Bj-VII (de BthTX-I; um homólogo Lys49 PLA2) e 6-1 e 6-2 (de BthTX-II; um Asp49 PLA2) do veneno de cobra B. jararacussu por SDS-PAGE em tampão tricino no a ausência e presença de ditiotreitol revelaram um homodímero com uma massa molecular estimada de aproximadamente 30 kDa (massa de monômero de aproximadamente 15 kDa). Esse achado indica que essas toxinas formam complexos diméricos - uma tendência relatada anteriormente entre os PLA2s. Essas toxinas foram testadas quanto à viabilidade com o teste MTT, que é usado para examinar os efeitos das fosfolipases na viabilidade mitocondrial das células. As toxinas também foram analisadas quanto à citólise das linhas celulares de fibroblastos NIH 3T3 e COS7 por quantificação da lactato desidrogenase liberada no meio. Os resultados indicam que o PLA2s 6-1, 6-2 e o homólogo de Bj-VII PLA2 estudados aqui induzem edema moderado da almofada das mãos e miotoxicidade local. Além disso, a exposição a essas fosfolipases levou a uma redução na viabilidade dos fibroblastos; na dose de 1 µM de PLA2 testada, foi observada uma redução de 50% na viabilidade celular. Os presentes achados indicam que a atividade inflamatória observada no envenenamento pode estar correlacionada com a citotoxicidade observada nos fibroblastos. 6-2 e o homólogo de Bj-VII PLA2 estudado aqui induzem edema moderado da almofada das mãos e miotoxicidade local. Além disso, a exposição a essas fosfolipases levou a uma redução na viabilidade dos fibroblastos; na dose de 1 µM de PLA2 testada, foi observada uma redução de 50% na viabilidade celular. Os presentes achados indicam que a atividade inflamatória observada no envenenamento pode estar correlacionada com a citotoxicidade observada nos fibroblastos. 6-2 e o homólogo de Bj-VII PLA2 estudado aqui induzem edema moderado da almofada das mãos e miotoxicidade local. Além disso, a exposição a essas fosfolipases levou a uma redução na viabilidade dos fibroblastos; na dose de 1 µM de PLA2 testada, foi observada uma redução de 50% na viabilidade celular. Os presentes achados indicam que a atividade inflamatória observada no envenenamento pode estar correlacionada com a citotoxicidade observada nos fibroblastos