Muscle biopsy technique for electrophoresis analysis of fish from the genus Brycon

Abstract

Protein and mitochondrial DNA have been used as molecular markers to assess variability in stock identification studies of fishes. Protein and mtDNA used for electrophoretic analysis are extracted from tissues, which often leads to death of the individuals. In this study, we present a skeletal muscle biopsy procedure to extract mitochondrial DNA that does not require specimen sacrifice. Eighty pirapitinga-do-sul (Brycon opalinus) were biopsied by the present technique. with no mortalities recorded. Total DNA was extracted from muscle and digested by restriction enzymes ApaI and HpaI. The mtDNA fragment patterns were hybridized with P-32-labeled pirapitinga-do-sul mtDNA probes. The described technique is simple and may be useful in protocols requiring tissue extraction for DNA and protein analyses without loss of the individual investigated.

Proteína e DNA mitocondrial têm sido utilizados como marcadores moleculares para avaliar a variabilidade nos estudos de identificação de peixes. A proteína e o mt DNA utilizados para análise eletroforética são extraídos dos tecidos, o que geralmente leva à morte dos indivíduos. Neste estudo, apresentamos um procedimento de biópsia do músculo esquelético para extrair DNA mitocondrial que não requer sacrifício da amostra. Oitenta pirapitinga-do-sul ( Brycon opalinus ) foram biopsiadas pela presente técnica, sem mortalidade registrada. O DNA total foi extraído do músculo e digerido pelas enzimas de restrição Apa I e Hpa I. Os padrões de fragmentos de mt DNA foram hibridados com 32S ondas de mt DNA de pirapitinga-do-sul marcadas com P. A técnica descrita é simples e pode ser útil em protocolos que requerem extração de tecido para análises de DNA e proteínas sem perda do indivíduo investigado.